最火关于HPLC的流动相十个你不知道的坑试验设备塑料包装藏饰挂件非标螺栓绝缘材料z
校准pH计,得到水溶液的正确pH回读值——您要验证的缓冲液是含水的。如果你用有机添加剂测量该夹具不应引发试样在夹具处断裂pH门、盖装卸应便当值,得到的pH值会与添加有机溶剂之前的值不同。
然而,最重要的一点是要保持一致。如果你总是在加入有机溶剂之后测量pH值,那么务必保证在使用的方法中陈述你的步骤,这样的话其他人就会按照统一方式进行。这种方式并不保证百分百准确,但是至少可以保持方法的前后统一。这也许会比得到精准的pH值更加重要。
没有使用缓冲液
缓冲剂的作用就是用来控制Ph值并阻运动眼镜止其发生变化。很多其他方法会改变流动相的Ph值,会引起停留时间、峰形以及峰值响应的漂移。
甲酸、TFA等不是缓冲剂。
没有在正常酸碱度范围内使用缓冲液
每个缓冲盐有2个pH单位范围宽度,在这个范围内可以提供稳定性最佳的pH值。窗口之外的缓冲盐不具备有效的抗pH值变化能力。要么在正确的范围内使用缓冲剂,要么选择一种缓冲剂可以涵盖你所需要的pH值。
向有机溶液中加缓冲液
将缓冲溶液与有机相混合,会极有可能引起缓冲液沉淀。在很多情况下,即使沉淀现象已经发生了,但仍很难被发现。记住,一定要将有机溶液加入到二手货车水相当中,这可以很好的降低缓冲液沉淀的几率。
从0%用泵±10%混合浓度梯度
现在使用的泵可以有效的混合流动相并实现脱气,但并不是使用你的方法的任何人都会配有高质量的泵。将A和B混合到一个单独的溶液中,在100%线上运行。
比如说通过用50ml水混合制备有机950ml起始混合物。这样做的好处就是可以减少HPLC之间的可变性,减少系统中产生气泡和沉淀的可能性。值得注意的是泵混合液的比例是95:5并不代表瓶体的预混合保留时间也为95:5。
不要使用正确的改数据备份:测试性酸或改性碱改变缓冲液
只能使用形成你使用的缓冲盐的酸或碱。比如磷酸钠缓冲液应仅用磷酸或氢氧化钠调节。
没有在方法中阐述有关缓冲液的全部信息,比如说在1000ml的水中加入5g磷酸钠。
缓冲剂的类型决定了能够缓冲的Ph范围。所需的浓度决定了缓冲强度。5克或无水磷酸钠和5克一水合物磷酸一钠具有不同的缓冲强度。
还没先检查就开始添加有机溶液
如果上一个方法中基线B中使用过的是缓冲液,而你的方法中,基线B使用的是有机溶液,好在你可以沉淀泵管和泵头中的缓冲剂。
支起瓶体清空最后一滴
很有可能你没有足够的流动相完成整个操作,最后样品会冒烟的。除了可能存在烧干泵系统和柱子的可能性之外,流动相也会蒸发的一干二净,瓶体顶部的流动相会发生变化。
利用超声脱气的流动相
最重要的一点就是确保所有的缓冲盐已经溶解,但是这是一种效果最差的脱气方式,并且它会很快让流动相升温,从而引起有机成分蒸发掉。为了省去之后不必要的麻烦,请用五分钟时间使用真空过滤你的流动相。
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